重庆市发布一项山羊化脓隐秘杆菌PCR检测方法新标准-

　　上海千实精密机电科技有限公司行业资讯：PCR即聚合酶链反应，是利用一段DNA为模板，PCR检测方法在临床上快速诊断细菌性传染病等方面具有极为重要的意义。近日，重庆市一项使用PCR检测方法的相关标准完成备案——《基于plo基因的山羊化脓隐秘杆菌PCR检测方法》，并计划于9月1日起实施。

　　DB50/T 1244-2022 基于plo基因的山羊化脓隐秘杆菌PCR检测方法

　　《基于plo基因的山羊化脓隐秘杆菌PCR检测方法》规定了基于plo基因的山羊化脓隐秘杆菌PCR检测方法的缩略语、原理、试剂材料、仪器设备、方法步骤、结果判定、废弃物处理等要求。此文件适用于山羊化脓隐秘杆菌病的PCR诊断。

　　文件针对山羊化脓隐秘杆菌的plo基因，设计合成特异引物，提取细菌DNA作为模板，在DNA聚合酶的作用下，经高温变性、低温退火和中温延伸的多次循环，使特异DNA片段的拷贝数放大数百万倍。将扩增的DNA片段经琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶成像仪观察，可见阳性条带。该检测方法，只能从化脓隐秘杆菌基因组DNA中扩增出特异条带。

　　文件中介绍到的试剂材料包括无水乙醇、核酸染料、DNA上样缓冲液、琼脂糖、TSA固体培养基、TSB液体培养基、TAE电泳缓冲液等。介绍的仪器设备包括电子天平、高压灭菌锅、高速离心机、二级生物安全柜、恒温培养箱、PCR仪、电泳仪等。

　　另外，文件对工作中样品的采集与保存、样品的处理、DNA的提取、PCR扩增等过程也进行了详细的阐述。要求检测结果成立的条件为阳性对照PCR产物经电泳后在264bp出现目的条带，阴性对照PCR产物电泳后没有条带，并对结果描述及判定做了详细说明。