上海千实有限公司解读高效液相色谱常见问题-

　　1、液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？
　　①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。
　　②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子
　　③可能柱超载，减少进样量。
　　2、HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法是什么？
　　①样品量不足，解决办法为增加样品量
　　②样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
　　③样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器
　　④检测器衰减太多。调整衰减即可。
　　⑤检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数
　　⑥检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。
　　⑦检测池中有气泡。解决办法为排气。
　　⑧记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。
　　⑨流动相流量不合适。调整流速即可。
　　⑩检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。
　　3、做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？
　　①泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；
　　②比例阀失效，更换比例阀即可；
　　③泵密封垫损坏，更换密封垫即可；
　　④溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；
　　⑤系统检漏，找出漏点，密封即可；
　　⑥梯度洗脱，这时压力波动是正常的。
　　4、我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？
　　柱压过高是HPLC柱用户常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。
　　①拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；
　　②把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；
　　③将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查；只用于使用过的柱子。
　　④更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题。
　　5、色谱柱中的流动相会排干吗？
　　不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。因为泵只能输送液体，而不能输送空气。
　　相比之下，另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。同样，整个色谱柱干涸的情况不太容易发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉所有溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。即使色谱柱真的变干了，也不一定就不可救药了。可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂（如经氦气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。色谱柱大约需要（以1mL/min的流速）冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。
　　6、为何出现峰展宽？
　　①样品体积过大--用流动相配样,总的样品体积小于峰的15%
　　②在进样阀中造成峰扩展--进样前后排出气泡以降低扩散
　　③数据系统采样速率太慢--设定速率应是每峰大于10点
　　④检测器时间常数过大--设定时间常数为感兴趣峰半宽的10%
　　⑤流动相粘度过高--增加柱温,采用低粘度流动相
　　⑥检测池体积过大--用小体积池,卸下热交换器
　　⑦保留时间过长--等度洗脱时增加强溶剂含量,也可用梯度洗脱
　　⑧柱外体积过大--将连接管径和连接管长度降至小
　　⑨样品过载--进小浓度小体积样品
　　7、除了在线脱气，常用的实验室脱气方式还有哪些？
　　加热回流脱气，脱气效果，但无法保持；氦脱气，此方法脱气效果佳，能除去百分之九十以上的空气，但氦气价格太贵，所以用的不多；真空脱气，效果仅次于氦脱气，但脱气过程中容易造成样品溶液挥发损失；超声脱气，只能脱去约百分之三十的空气，但在实验室中常用。目前还是尽量争取用在线脱气，方便且效果好。
　　8、如何简单判断比例阀是否内漏？
　　设定泵使用一个单独通路（A），打开Purge阀，流速5ml/min，提起其他溶剂瓶内的溶剂过滤头直至离开液面，观察这些通路（B、C、D）内的溶剂是否随着流动，正常时均不应流动。

　　

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